用途：使用于師團在實驗室或野外條件下進行水中**總數和和大腸菌群的檢驗。必要時還可進行水中腸道致病菌（沙門氏菌屬和志賀菌屬）的檢驗。

性能：本箱操作簡便、檢驗快速、結果準確。其中，水中**總數的檢驗采用 膜——營養墊法。所用的培養基是新研制的無瓊脂培養基。可獲得與實驗室條件下常規標準平板法同樣的結果，水中大腸菌群的檢驗采用 膜——營養墊法。所用的培養基是新研制的改良遠藤培養基，比普通的遠藤氏培養基能獲得更加滿意的檢驗結果。尤其是對水中損傷大腸菌的檢驗有較好的效果，這樣對**后水的檢驗能獲得更加**可靠的結果；水中腸道致病菌——沙門氏菌屬和志賀氏菌屬的檢驗，采用常規和快速方法相結合。先用新研制的沙門氏菌屬——志賀氏菌屬通用增菌培養基增菌，然后用協同凝集試驗法進行檢驗，24小時可初步報告結果，箱內還裝有新研制的沙門菌屬——志賀氏菌屬選擇培養基，必要市可進行常規檢驗，并可獲得準確的檢驗結果。

整套裝置由采樣檢驗箱和選購部分-微型培養箱組成?？稍谝巴饣颥F場進行采樣和檢驗，微型培養箱采用交、直流兩用電源可在沒有交流電條件下使用。

箱內的各種培養基忽然試驗器材用完后可隨時與億通電子有限公司聯系補充。

使用本檢驗箱時首先將箱內酒精燈裝入酒精；酒精棉球瓶中裝入75%濃度的酒精。

一、 采樣檢驗箱內器材和藥品

01、說明書                       1份

02、DY—II型移液管              1支

03、DY—II型移液管吸嘴                      10支

04、接種棒                                   1支

05、金屬鑷子                                 1把

06、圓珠筆                                   1支

07、特種紅鉛筆                               1支

08、塑料培養皿                               20付

09、營養肉湯培養基                           50管

10、改良遠藤培養基                           50管

11、沙門似—志賀氏菌屬增菌培養基             20管

12、協同凝集試劑                             1套

13、沙門氏—志賀氏菌增菌瓶                   3個

14、改良SS選擇瓊脂                          1瓶

15、克氏雙糖鐵培養基                         1瓶

16、水樣稀釋瓶（50ml）                       1個

17、酒精棉球瓶                               1個

18、微孔 膜（ 35mm 0.45um）                 3*100張

19、紙墊（ 47mm）                           7*40張

20、小杯（45-150ml）                         1個

21、酒精燈                                   1付

22、塑料注射器（20ml）                       1付

23、**過濾器                               1套

24、小毛巾                                   1條

25、火柴                                     1盒

26、塑帽試管                                 10支

二、 采樣檢驗箱使用方法

1、 **中數檢驗方法

1. 1試驗準備：

1.1. 1水樣采集：采水容器事先**或使用前用被檢水反復沖洗數次，然后采水。1.1.2移液管吸嘴的**：取下套在酒精燈上的支架，把支架小口端安裝在酒精燈口上， 杯放在支架上，倒入適量水，把吸嘴放入 杯內，煮沸5-10分鐘，備用。

1.2. 肉湯營養紙墊制備：

1.3. 1將小皿用酒精棉球擦拭**，晾干后每皿加一片紙墊。

1.2.2取肉湯安瓶一支倒人小杯內，加入15mi蒸餾水或自來水煮沸溶解即為營養肉湯。必要時?？梢灾苯佑瞄_水沖泡溶解。

1.2.3取盛有紙墊小皿，每皿紙墊加營養肉湯1.8-2.5ml（液體充盈程度以不淹沒濾膜為宜），即為肉湯營養墊，備用。

1. 3檢驗水樣：

 1**過濾器系統的組裝；從檢驗箱中取出過濾器，將濾床 板端插入檢驗箱前側箱壁與塑料板之間的夾縫內，把三通管帶細塑料管一端插入濾器下面的孔內，三通管大孔端插入20ml注射器頭下，接頭處要嚴密。備用。

1.3.2**過濾器的處理：用燃著的酒精棉球擦拭**過濾器的濾床和漏斗，待涼后，取一片濾膜，放在濾床上，裝上漏斗并擰緊。

1.3.3過濾水樣：生活飲用水為1ml，平分兩份，水源水可同時做原水1ml和稀釋50倍（箱內50ml小瓶放入1ml被檢水源水，家50ml冷開水或無菌水）1ml兩個稀釋度，水樣加到濾器中后使之全部覆蓋膜面，然后抽濾至水干，將阻菌濾膜面朝上貼于肉湯營養墊上。注意膜與營養墊之間不要有氣泡。

1.4培養：37℃培養箱中培養24小時。

1.5菌落計數：計數膜上所有菌落數。

   **總數計數方法：

   **總數（個/ml）=膜上的平均菌落數*稀釋倍數

1. 6注意事項：

1.6.1 檢驗**總數過程中應盡量做到無菌操作。

1.6.2 每檢驗完一個水樣應用燃著的酒精棉球燒灼漏斗和濾床后，再進行檢驗**個樣品。

1.6.3 每次試驗完畢，必須用干紗布把過濾漏斗和濾床等處擦干，以免腐蝕漏斗。

2、 大腸菌群檢驗方法：

 2.1 試驗準備： 同**總數檢驗方法（1.1）

 2.2 遠藤營養墊的制備：

  2.2.1 將小皿用酒精棉球擦拭**、晾干。每皿內加一片紙墊。

  2.2.2 取遠藤培養基安瓶一支，倒人小杯內，從酒精棉球瓶內取出棉球擠壓1-2滴酒精于培養基上使其剛好濕透，用玻棒攪勻，然后加15ml冷開水或蒸餾水，搖勻溶解即為遠藤營養墊。

  2.2.3 取盛有紙墊培養皿，每皿紙墊加遠藤培養液1.8-2.5ml（液體充盈程度以不淹沒濾膜為宜），即為遠藤營養墊。

 2.3 檢驗水樣：

  2.3.1 **過濾器系統的組裝： 同**總數（1.3.1）  

  2.3.2 **過濾器系統的處理： 同**總數（1.3.2）

  2.3.3 過濾水樣：生活飲用水，應檢100-330ml，將被檢水樣倒入漏斗內至上刻度線處（100ml），檢驗330ml水量時，可過濾100ml后，再加100ml，直至濾完330ml，（如遇不易過濾水，可分2-3張膜過濾，分別貼于2-3個遠藤應營養紙墊上，結果將膜上菌落數相加計算），將膜取下，小心貼于備用的遠藤營養紙墊上。此時應注意勿使濾膜與營養墊之間留有氣泡；檢驗未處理的水源水，取1ml水眼個，方法：同**總數，不同處僅把阻菌膜貼于遠藤營養墊上。

2.4 培養：37℃培養箱中，培養18-24小時。

2.5 菌落計算： 計數膜上帶有金屬光澤或深黑色菌落。即為大腸菌數。

        大腸菌群數計算方法：

大腸菌群數（個/升）=   膜上菌落數*稀釋倍數 *1000

                       被檢水樣體積(ml)

    2.6注意事項：同一水樣，同時檢驗**總數和大腸菌群時，可不處理濾器；其它項同**總數(1.6)

    3\水中腸道致病菌（沙門氏菌屬和志賀氏菌屬）檢驗方法：

     3.1 快速檢驗法：

      3.1.1增菌培養：

       3.1.1.1 直接增菌法：吸取待檢水樣10ml放入增菌瓶中，加入一小管（0.44g）沙門氏菌—志賀氏菌通用增菌培養基，充分振搖攪拌使其溶解。然后置37℃培養箱培養24小時。

       3.1.1.2濃縮增菌法：吸取待檢水樣100ml（更大或更小體積的水樣，視水質而定）通過濾膜過濾，然后將阻菌濾膜取下，放入含有一小管（0.44g）沙門氏—志賀氏菌通用增菌培養基的10ml增菌液中（可用被檢水或無菌蒸餾水配制增菌液）置37℃培養箱，培養24小時。

      3.1.2 協同凝集試驗：具體步驟見“協同凝集試驗方法”。不同種類的抗原液（即不同種類的沙門氏菌、志賀氏菌增菌后的菌懸液）分別用對應的凝集試劑進行協同凝集試驗，根據凝集與否判斷為陽性或陰性。

      3.1.3 協同凝集試驗方法：

       3.1.3.1 取0.5ml生理鹽水將協同凝集試劑溶解，用手搖勻。

       3.1.3.2 取1滴凝集試劑于載玻片上，加一滴抗原液（經增菌液培養24小時的水樣），充份混勻，1-3分鐘內觀察結果。

       3.1.3.3 結果判斷標準：

          懸液完全透明，出現大量凝塊和顆粒為++++

          透明度稍差，出現大量凝塊和顆粒為+++

          懸液半透明，凝塊和顆粒較少為++

          懸液不透明，有少量顆粒為+

          懸液渾濁，無顆粒出現為—

          ++以上為陽性，+為可疑。

          對照：標準抗原作陽性對照

          生理鹽水作陰性對照

      3.1.3.4 注意：協同凝集試劑應置低溫冷凍保存，有效期3年。

     3.2 常規檢驗方法：

      3.2.1 增菌培養：快速檢驗法中的直接增菌法和濃縮增菌法相同，其中志賀氏菌的增菌時間可以為16-18小時。

      3.2.2 平板分離：取上述經增菌的沙門氏菌、志賀氏菌培養液，用接種環化線接種改良SS選擇瓊脂平板，置37℃培養箱中培養24小時。（如使用其它選擇培養基時，請注意對宋內氏痢疾桿菌是否良好，還是不生長或生長很差）。

      3.2..3 挑選菌落接種雙糖管：每個平板挑取5個以上可疑腸道病原菌菌落，接種于雙糖鐵或三糖鐵試管培養基中（將克氏雙糖鐵干燥培養基加水煮沸溶解后分裝于塑帽試管中，3ml，高壓蒸汽**或水浴100℃15分鐘后放成高層斜面，凝固后即成）。置37℃培養箱中培養18-24小時。

        附：沙門氏菌屬和志賀菌屬在改良SS選擇瓊脂平板上的菌落特征：

        沙門氏菌屬，菌落呈無色透明或半透明或中間有黑心，直徑為1-3毫米（培養時間長時，有的菌落中心略呈微粉色，但與紅色的大腸菌菌落完全不同）。

        志賀氏菌屬，菌落呈無色透明或半透明（宋氏痢疾桿菌的菌落中心有時略呈淺色），直徑1-3毫米。

       3.2..4 生化反應及血清學檢驗：

           沙門氏菌屬：在雙糖鐵或三糖鐵培養基上，底層變黃（分解葡萄糖產酸），產氣或不產氣（如傷寒沙門氏菌不產氣），一般產H2S；斜面呈紅色（不分解乳糖）。用沙門氏菌多價血清或單價抗血清進行凝集試驗，根據凝集與否判斷為陽性或陰性。

           志賀氏菌屬：在雙糖鐵或三糖鐵培養基上，底層變黃（分解葡萄糖產酸），不產氣，無動力，不產H2S；斜面呈紅色（不分解乳糖）。用志賀氏菌多價血清或單價血清進行凝集試驗，根據凝集與否判斷為陽性或陰性。

              中華人民共和國飲水衛生標準（**指標）